豇豆中农残能力验证经验分享
导读:农残能力验证是农产品检测机构检测水平的测试,基本是省级农业部门进行考核,能力验证年年有,每年都会有一些问题出现,总结了一些经验,分享给大家。
一、 准备工作
能力验证样品为豇豆,考核参数见下图:
接到能力验证文件以后,我们进行了一系列的准备工作。
1.样品基质准备
购买了豇豆样品,进行了浸泡,然后清洗匀浆,按照《GB 23200.121-2021》方法做前处理,收集样品基质。基质上机检测,找最干净的那一种来当基质。
图1:收集豇豆基质
2. 前处理准备按照 《NY/T 761-2008》、《GB 23200.113-2018》、《GB 23200.121-2021》等前处理方法,准备了玻璃器皿、试剂、破碎机、匀浆机、氮吹仪、烘干器等。
图2:前处理准备
3.仪器的准备
此次需要操作两台气相色谱仪,一台气质联用仪和一台液质联用仪,对仪器进行了进样垫、衬管、色谱柱等的检查,基本上都换成新的。
4. 标液的准备
根据仪器上认证的参数,各仪器根据参数配成混标,在四台仪器上分别做标液模板,对于响应度不好的进行调整。
二、检测过程
能力验证样品为豇豆,采用塑料离心管封装。考核样品质量为25.00g,须一次性全部转移提取。
1.NY/T761-2008
样品量只有25.0g,如果做不同的前处理,样品量是不够的。所以提取方法是一样,净化方法分开,一个用《NY/T 761-2008》方法,上气相色谱仪检测,一个用《GB 23200.121-2021》方法,上气质联用仪与液质联用仪检测。
1.1提取
将25.0g菜样,加50.00mL乙腈,要分次清洗塑料离心管,转移至广口瓶中,在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤,滤液收集到装有5g∽7g氯化钠的100mL具塞量筒中,收集滤液40mL∽50mL,盖上塞子,剧烈1震荡min,在室温下静置30min,使乙腈相与水相分层。
1.2净化
从100mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液,放人150mL烧杯中,将烧杯放在80℃水浴锅上加热,杯内缓缓通入氮气或空气流,蒸发近干,加人2.0mL丙酮,盖上铝箔,备用。
将上述备用液完全转移至15mL刻度离心管中,再用约3mL丙酮分三次冲洗烧杯,并转移至离心管,最后定容至5.0mL,在旋涡混合器上混匀,分别移入两个2mL自动进样器样品瓶中,供色谱测定。
图4:有机磷净化过程
从100mL具塞量筒中吸取10.00mL乙腈溶液,放人150mL烧杯中,将烧杯放在80℃水浴锅上加热,杯内缓缓通人氮气或空气流,蒸发近干,加入2.0mL正己烷,盖上铝箔,待净化。
将弗罗里矽柱依次用5.0mL丙酮十正己烷(10+90)、5.0mL正已烷预淋洗,条件化,当溶剂液面到达柱吸附层表面时,立即倒入上述待净化溶液,用15mL刻度离心管接收洗脱液,用5mL丙酮+正己烷(10十90)冲洗烧杯后淋洗弗罗里矽柱,并重复一次。将盛有淋洗液的离心管置于氮吹仪上,在水浴温度50℃条件下,氮吹蒸发至小于5mL,用正己烷定容至5.0mL,在旋涡混合器上混匀,分别移人2mL自动进样器样品瓶中,待测。
图5:有机氯净化过程
2.GB23200.121方法
从100mL具塞量筒中吸取8.0mL上清液,至PSA 400mg,C18 400mg,MgSO4 1.2g的净化管中,涡旋混匀1min,4200r/min离心5min,吸取上清液过0.22μm滤膜,分别上气相色谱仪、气质联用仪、液质联用仪等测定。
图6:GB23200.121方法净化过程
三、质控样品
上机后,考核样品得出结果,做质控样品前处理,前处理过程进行了质量控制,质控样品是市场上购买的豇豆样品,进行破碎,分别进行NY761-2008、GB23200.121方法进行前处理,上机测定,确定是无农药残留的样品,根据上述结果进行加标试验。
1. 配制标液
加标试验时发现加标回收率不正常,检查得知,所配标液为0.03ug/mL或0.05ug/mL,而单标标液浓度为10ug/mL,直接配制成0.03ug/mL,误差较大。将单标标液浓度由10ug/mL配制成1.0ug/mL,再配制成0.03ug/mL或0.05ug/mL。
2. 加标问题
用所配的标液来计算质控样品,依然有回收率低可高的问题,再次查找原因,加标时,从10ug/mL的单标里加到豇豆里,添加量为0.03mg/kg或0.05mg/kg时,加入的标液量很小,比如在25.0g菜中添加0.03mg/kg的毒死蜱时,从10ug/mL标液中吸75uL,吸的量太少可能引起误差,而混标从1.0ug/mL的标液来配制,这样也会造成误差。所以加标时也选择从1.0ug/mL的标液来添加。样品结果见表1,质控样品结果见表2。
四、纠结
其它地市同行传来补考的消息,这使我们很震惊,询问他们补考的原因,有两个,一个是异菌脲未检出,二是水胺硫磷回收率高为130%以上。
随即对考核样品的异菌脲进行了气相色谱仪、液质联用仪的检测,液质联用仪用离子对进行筛查,气相色谱仪使用在考核样品中添加异菌脲来判断,异菌脲如果在考核样品出现峰,说明原样品没有,如果在原来的峰上增加了峰高,说明原样品中有异菌脲。最后判断无异菌脲添加,不用报。
图7:判断考核样品中是否有异菌脲
五、污染
做能力验证时,我们发现干净的豇豆基质中居然发现有毒死蜱,可能是污染了,这样能力验证样品的结果就可能有问题,立即查找污染原因。
1. 玻璃器皿、备件污染怀疑是玻璃器皿污染,从仓库里领新的具塞量筒、烧杯、广口瓶等,清洗后使用。清洗过程发现有交叉污染的现象,比如所有的玻璃器皿用完后,浸泡在一个大盆中,这样配过标液的容量瓶、加标的样品、空白样品等都在一起,因为瓶子太多,如果清洗不干净,反而引起交叉污染。所以清洗时选择不同的盆清洗不同的玻璃器皿,比如配标液的容量瓶单独浸泡,质控样品与考核样品所用的玻璃器皿一起浸泡,空白基质的玻璃器皿单独浸泡。
烘干玻璃器皿的烘干头要进行清洗,氮吹仪上的氮吹针要进行清洗,匀浆头要拆卸下来,进行深度清洗。
图9:清洗仪器备件
2.试剂污染
对所用的乙腈、甲醇、丙酮、正己烷等试剂都上机进行检测,对移液管刻度管也进行了吸液检测,看是否有毒死蜱的检出。
3.标液污染
配制毒死蜱的单标,发现与5种混标的峰面积相差3倍,这样的话就有一个重要的问题,如果用单标毒死蜱来计算考核样品,数据是0.0315mg/kg,而用混标来计算,数据是0.0105mg/kg,用哪种标液为准?是哪种标液造成毒死蜱的污染?
将5种混标两两相配,并将5种混标逐一添加,进液质联用仪检测峰面积,发现氟虫腈加入后,毒死蜱的峰面积会大幅度增加,判断氟虫腈里有毒死蜱,氟虫腈污染。重新配制氟虫腈,再配制5种混标,峰面积正常。计算考核样品后,上报数据。排查污染的表格见表3。
4.上报数据
找到原因后,重新配制标液,进单标确定标液无污染后,开始进行考核样品的检测,同时做质控样品。一个考核样品里添加农药也不少,结果数据见表4,质控样品数据见表5。数据上报后,顺利通过能力验证。
六、总结
能力验证过程很辛苦,得出准确的数据依赖于各环节的掌控,比如玻璃器皿、前处理过程、仪器维护、数据研判等等。但这些问题仅仅是技术问题,还有重要的一环,是实验室管理,通过能力验证暴露出一些管理方面的欠缺。
1、人员分工
此次能力验证,参与人员6人,未进行清晰分工,配标液的人员有好几个,标液污染后,无法追溯。像这样的人员参与较多的工作,应该有一个明确的任务分工表,每人负责其中一项,旁边还要有监督人员,每一个过程便于追溯,不至于人多手杂,出错后无从查起。
2、交叉污染
清洗玻璃器皿时,一定要防止交叉污染,要分类进行清洗,自来水、纯水、乙醇等步骤不可少。烘干玻璃器皿的烘干头要进行清洗,氮吹仪上的氮吹针要进行清洗,匀浆头要拆卸下来,进行深度清洗。
3、标液问题
标液配制问题,要进行10倍稀释,100倍以上稀释时,会引起大的误差,而加标时也要与配标液的标液浓度一致,这样质控样品的回收率才会在正常范围之内。
为防止标液污染,在配混标的同时,要进行单标的配制,同时上机检测,峰面积相差太大时,应该是标液受到污染。
4、能力验证思路
拿到考核样品,一般会计算出浓度,再进行质控样品的前处理,质控样品会用与考核样品的含量相近的加标量来检测,但是当标液污染时,质控样品也会失去准确性,相信质控样品的含量,最后导致考核样品数据错误,能力验证不通过。这点一定要注意,整个配制标液或加标时,标液要保证是新打开的,稀释倍数不要超过10倍,标液注意不要污染。
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